產(chǎn)品簡介：

RCA（Rolling Circle Amplification，滾環(huán)擴增）是利用 phi29 DNA 聚合酶的超長合成能力，在一定條件下（如隨機引物、dNTP、Mg 離子存在時）能夠以線狀的超長基因組DNA 或環(huán)化后的短DNA 為模板進行全基因組擴增的技術(shù)。本產(chǎn)品是基于 RCA 技術(shù)，針對環(huán)狀 DNA 為模板專門開發(fā)的 RCA 試劑盒。

產(chǎn)品特點：

1.即開即用，十分簡單方便，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.直接使用純化的環(huán)狀單鏈DNA 或環(huán)狀雙鏈 DNA 為模板。如果樣本為線狀 DNA， 需要預(yù)先對其進行環(huán)化（本公司有單鏈 DNA 環(huán)化和雙鏈 DNA 環(huán)化試劑盒）。

3.RCA 屬于恒溫擴增，操作簡單，但如果要實時監(jiān)測，需要熒光定量 PCR 儀器。如果沒有，也可以電泳檢測或PCR 檢測擴增效果。

4.含熒光染料，可以實時監(jiān)測 RCA 反應(yīng)過程，不需要跑電泳檢測，節(jié)約寶貴樣品（因為進行 RCA 擴增的樣品都非常珍貴）。

5.實時檢測使得反應(yīng)可以在平臺期后就可以結(jié)束，避免 phi29 DNA 聚合酶具有的強 3-5 外切酶活性降解已經(jīng)合成的 DNA。

6.phi29 DNA 聚合酶具有的強 3-5 外切酶活性，故擴增具有高保真性。

7.可以將模板 DNA 在幾個小時到十幾小時內(nèi)擴增萬倍左右。

8.本產(chǎn)品足夠 50 次 10 ?L 體系的熒光染料實時 RCA 反應(yīng)。

9.得到的 DNA 可以直接用于測序、酶切或 PCR 等后續(xù)實驗。染料法實時 RCA 試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

規(guī)格及成分

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

環(huán)狀單鏈 DNA 模板或環(huán)狀雙鏈 DNA 模板、超純水。

使用方法：

1.按下表設(shè)置 10 uL 的環(huán)狀DNA RCA 反應(yīng)：

2.放熒光定量 PCR 儀器上，設(shè)置 30℃保溫 16 小時，每 10 分鐘設(shè)置成一個循環(huán)， 采集一次 SYBR 通道的熒光信號。由于是可以實時檢測反應(yīng)，所以反應(yīng)不一定要在設(shè)置時間到達(dá)后結(jié)束，可以在擴增曲線進入平臺期后（已經(jīng)沒有新的 DNA 合成）結(jié)束。因為phi29 DNA 聚合酶有很強的 3-5 外切酶活性，在聚合反應(yīng)停止后，它可能會進入酶切模式，逐漸降解已經(jīng)合成的DNA。

3.65℃保溫 10 分鐘滅活酶。由于 phi29 DNA 聚合酶有很強的 3-5 外切酶活性， 因此必須滅活，否則它將逐漸降解已經(jīng)合成的DNA。

4.典型實驗結(jié)果。有擴增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線，無模板對照將沒有此標(biāo)準(zhǔn)擴增曲線（見下圖）或擴增曲線：

5.如果沒有熒光定量 PCR 儀器，則只能電泳檢測或PCR 檢測是否有擴增。

6.擴增所得 DNA 可以用于后續(xù)實驗。

選擇我們的染料法實時 RCA 試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！