產品簡介：

基因組 DNA（gDNA）污染是 RNA 樣品中普遍存在的現象。由于污染的gDNA 也會作為后續PCR 的模板，因此會嚴重干擾后續 RT-PCR 的效率和準確性，尤其是定量RT-PCR。目前的去gDNA 污染的方法主要是用RNase-free DNase 法降解RNA樣品中的 gDNA，滅活 DNase 后，然后再進行 RT 反應。此方法分兩步進行，十分不便。為了克服上述方法的缺點，本公司開發出了本產品。

產品特點：

1.一管式去除 gDNA，跟 RT-PCR 反應的設置同步進行。

2.高效，可以使樣品中殘留的 gDNA 污染（ng 級）降低到 PCR 檢測不到的水平。

3.跟PCR 和熒光定量PCR 兼容，包括基于古細菌DNA 聚合酶的PCR（如Pfu DNA

聚合酶，多為高保真酶）。

4.本試劑盒所用的 MMLV 逆轉錄酶為 RNase H 缺失突變，故合成 cDNA 片段長度可達 12 kb。還能用于 GC 含量高，二級結構復雜的RNA 模板。

5.本產品規格足夠 50 次 20uL 體系的 RT 反應。

6.除 gDNA RT 試劑盒只用于科研。

產品參數：

成份規格包裝

5×RT Buffer200uL0.5mL 綠蓋管

抗污染 MMLV 逆轉錄酶50uL0.5mL 紅蓋管

隨機引物(0.2 ug/uL)50 uL0.5mL 黃蓋管

10mM dNTP20 uL0.5mL 藍蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存, 有效期一年。

自備試劑

RNA 模板。

使用方法：

1.在一個干凈的無 RNase 反應管管中加入 RNA 模板，不超過 13uL。RNA 模板種類加入量

總 RNA100-500 ng

或 poly(A) mRNA10-500 ng

或專一的 RNA0.01 pg-500 ng

2.加入 4 uL 4×RT Buffer。

3.再加入 1 uL 抗污染 MMLV 逆轉錄酶。常溫放置 30 分鐘去除gDNA。

4.按下表加入引物：

引物種類加入量

或隨機引物(0.2 ug/uL)1 uL

或 RNA 模板專一性引物1 uL（20 pmol）

注意：隨機引物與 RNA 模板的比例跟 cDNA 合

成的平均長度成反比。

5.加入 1uL 10mM each 的dNTP。加入引物和dNTP 后必須馬上進入后續操作， 不要放置。

6.最后補水使得總體積為 20uL。

7.37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。但如果使用隨機引物，由于其很短，則改成 25℃ 5 分鐘以便其跟 RNA 結合。

8.42℃保溫 60 分鐘。但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，待合成了一段 cDNA 后，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。

9.70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，不需要純化。

10.輕輕吹打混勻，短暫離心，37℃保溫 60 分鐘進行抗污染逆轉錄。

11.95℃10 分鐘加熱滅活相關酶，短暫離心，直接作為模板用于后續常規 PCR、染料法 qPCR 或探針法 qPCR 實驗，或者長期放-20℃待用。用于后續 PCR 時，

一般使用量不超過終體積的 1/10，具體需要根據各廠家的PCR 試劑盒確定。

選擇我們的除 gDNA RT 試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！