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型號(hào)：
一管式點(diǎn)突變?cè)噭┖?/div>
描述：

一管式點(diǎn)突變?cè)噭┖心０彘L度為10-15 Kb的DNA（包括質(zhì)粒的長度）。由于起始模板DNA很少，得到的擴(kuò)增產(chǎn)物幾乎都是突變DNA，故突變效率高達(dá)90%。

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)廠家

  • 更新時(shí)間

    2026-09-07

  • 訪問量

    500
詳細(xì)介紹
品牌烜雅生物貨號(hào)XY-D-1869
規(guī)格10次供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
英文名稱One-Tube Point Mutagenesis Kit保存條件-20℃
有效期1年

產(chǎn)品簡介：

基因的定點(diǎn)突變是重要的分子生物學(xué)技術(shù)，廣泛用于載體構(gòu)建、基因改造、蛋白質(zhì)功能研究等領(lǐng)域。本產(chǎn)品就是專門用于從含有野生型DNA插入片段的質(zhì)粒DNA快速制備突變（包括點(diǎn)突變、插入突變和缺失突變）的試劑盒。


一管式點(diǎn)突變?cè)噭┖?/><strong></strong></p><p><strong>產(chǎn)品特點(diǎn)：</strong></p><p>1.直接使用甲基化的質(zhì)粒DNA作為模板，故模板必須是從dam+基因型的大腸桿菌宿主菌中制備的，常見的dam+菌株是DH5?。某個(gè)菌株是不是 dam+需要詢問菌株供用廠家。</p><p>2.有管式操作，整個(gè)過程只需要2小時(shí)。</p><p>3.模板DNA的需求量很少，只需要2 ng。</p><p>4.模板長度為10-15 Kb的DNA（包括質(zhì)粒的長度）。由于起始模板DNA很少，得到的擴(kuò)增產(chǎn)物幾乎都是突變DNA，故突變效率高達(dá)90%。</p><p>5.實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增，不需要電泳檢測(cè)，節(jié)約寶貴的樣本材料。</p><p>6.最終產(chǎn)物可以直接用于化學(xué)轉(zhuǎn)化或電轉(zhuǎn)化。</p><p>7.基于PCR擴(kuò)增，對(duì)模板DNA序列沒特殊要求，可以用于突變?nèi)魏蜠NA位點(diǎn)。</p><p>8.使用超保真酶，PCR過程中不會(huì)引入突變。</p><p>9.不但可以制備點(diǎn)突變，還可以制備1-3個(gè)堿基的缺失突變和插入突變。</p><p>10.本產(chǎn)品足夠10 次點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)。</p><p>11.一管式點(diǎn)突變?cè)噭┖兄荒苡糜诳蒲小?/p><p><br/></p><p><strong>產(chǎn)品參數(shù)：</strong></p><p>成份 規(guī)格包裝</p><p>染料法 2×超保真PCR MasterMix100 ?L0.5 mL 本蓋管</p><p>DpnI 限制性內(nèi)切酶，10 U/?L20 ?L0.5 mL 紅蓋管</p><p>超純水 1 mL1.5 mL 藍(lán)蓋管</p><p>使用手冊(cè) 1 份無</p><p>運(yùn)輸及保存</p><p>低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。</p><p>自備試劑</p><p>質(zhì)粒 DNA、突變引物、細(xì)菌轉(zhuǎn)化試劑。</p><p><br/></p><p><strong>使用方法：</strong></p><p>一、引物設(shè)計(jì)</p><p>1.需根據(jù)突變位點(diǎn)周邊序列設(shè)計(jì)兩條錯(cuò)位互補(bǔ)引物，引物的 Tm 應(yīng)該在 72℃左右，突變位點(diǎn)（可以是 1 個(gè)堿基，也可以是數(shù)個(gè)堿基）左右各有 14 個(gè)完-全互補(bǔ)的堿基對(duì)， 上引物和下引物的 3’端各多出 6 個(gè)堿基。下面為一個(gè)虛擬序列的兩條錯(cuò)位互補(bǔ)引物，XXX 表示三個(gè)野生型堿基。NNN 表示希望突變后得到的堿基。陰影部分的序列</p><p>跟其互補(bǔ)鏈?zhǔn)峭?全互補(bǔ)。</p><p>GCGATACGCAACTANNNGATCTCCATGCAGCTCATGC-3' 3'-TGCGACCGCTATGCGTTGATXXXCTAGAGGTACGTCG</p><p>2.引物的 GC 含量在 40％-60％之間，不能在 PCR 時(shí)形成引物二聚體。</p><p>3.引物必須 HPLC 純化。</p><p>4.本方法是以質(zhì)粒 DNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，因此質(zhì)粒 DNA 完整性非常重要。如果質(zhì)粒 DNA 有大量的 nick 或 gap（限制性內(nèi)切酶酶切雙鏈 DNA 不能發(fā)現(xiàn)某條單鏈 DNA 上是否有 nick 或 gap），則本方法的成功率將會(huì)降低。如果質(zhì)粒宿主菌 DNase 活性沒有去除干凈，從中純化的質(zhì)粒 DNA 將會(huì)有更多 nick。如果模板不是新鮮制備的質(zhì)粒 DNA，初步測(cè)試后效果不好，建議用自備的 E.coli DNA 連接酶對(duì) nick 進(jìn)行修復(fù)。操作請(qǐng)按E.coli DNA 連接酶使用手冊(cè)進(jìn)行。</p><p>二、一管式點(diǎn)突變 PCR（20 ?L 體系）</p><p>5.按下表設(shè)置兩個(gè) PCR 反應(yīng)：</p><p>成分樣本管陰性對(duì)照管模板 DNA2 ng-</p><p>染料法 2×超保真PCR MasterMix10 ?L10 ?L</p><p>自備引物一(10 ?M)1 ?L不加</p><p>自備引物二(10 ?M)不加1 ?L</p><p>補(bǔ)超純水到終體積20 ?L20 ?L</p><p>6.放入熒光定量PCR 儀中按下面參數(shù)進(jìn)行PCR：</p><p>步驟溫度時(shí)間循環(huán)數(shù)</p><p>變性98℃3 分鐘1 次</p><p></p><p>PCR98℃20 秒30 次，在</p><p>68℃時(shí)采集 SYBR</p><p>通道的熒</p><p>光信號(hào)</p><p>68℃30 秒</p><p>72℃30 秒/Kb（質(zhì)</p><p>粒 DNA 長度）</p><p>注意：由于本產(chǎn)品是染料法實(shí)時(shí) PCR，故盡管設(shè)置的循環(huán)次數(shù)是 30 次，但具體循環(huán)次數(shù)取決于擴(kuò)增曲線。最佳循環(huán)數(shù)是樣本管的擴(kuò)增信號(hào)剛好進(jìn)入平臺(tái)區(qū)的循環(huán)次數(shù)，在進(jìn)入平臺(tái)區(qū)后，可在復(fù)性步驟手動(dòng)停止 PCR。</p><p>7.按熒光定量 PCR 儀廠家提供操作流程進(jìn)行溶解曲線分析。樣本的 Tm 應(yīng)該比對(duì)照高</p><p>（長處更對(duì)照管如果有 Tm，也是引物二聚體的 Tm），如果兩者的 Tm 一樣，則可能是樣本擴(kuò)增失敗，需要電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的長度。</p><p>三、DpnI 酶消化和后續(xù)操作</p><p>8.在 PCR 反應(yīng)管中加入 1 ?L DpnI 限制性內(nèi)切酶，混勻后 37℃孵育 2 小時(shí)。</p><p>9.反應(yīng)液可以直接取 1-2 ?L 用于化學(xué)轉(zhuǎn)化和電轉(zhuǎn)化，或者放-20℃保存?zhèn)溆谩?/p><p>10.轉(zhuǎn)化后通常會(huì)得到 50 個(gè)-500 個(gè)菌落，95%是所需要的突變。而對(duì)照沒有菌落。</p><p>選擇我們的<strong><strong></strong><strong><strong></strong><strong><strong></strong><strong>一管式點(diǎn)突變?cè)噭┖?/strong></strong></strong></strong>，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！</p> </div> <div id= 產(chǎn)品咨詢

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